Cellometer K2 荧光细胞活力分析仪

适用于复杂原代样本分析的荧光细胞计数仪

我们的客户: Nexcelom Customers who purchase Cellometer K2, cell viability counter

Cellometer K2 荧光细胞活力分析仪介绍

简单的操作流程

Simple, User-friendly Procedure - pipette load sample for Cellometer K2, cell viability counter

加入20 µl样本

插入计数板

选择实验点击Count

60秒内得到结果!

60秒内即可完成自动细胞计数

Cellometer X2通过明场和荧光成像以及图像识别软件迅速准确地计数细胞,并自动计算和显示细胞数、浓度、直径和存活率%。

Results in less than 30 seconds 60秒内完成上样、图片查看、

K2可以让用户:

  • 增加通量
  • 提高准确性
  • 提高结果一致性
  • 确保正确获取所有数据
  • 分析不易计数的细胞(易成团,形状不规则等)
  • 消除判断错误、误数和使用者之间的差异

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原代细胞分析:PBMCs, 肝细胞和其他

Cellometer K2专为原代样本分析而设计,适用样本包括外周血、脐带血、骨髓,以及其他复杂样本:

  • 移植用有核细胞
  • 免疫研究中的PBMCs
  • 疫苗开发中的脾细胞
  • 细胞治疗中的干细胞
  • 肿瘤研究中的肿瘤悬液

通过将活的和死的有核细胞染上不同荧光,排除细胞碎片、血小板和红细胞的干扰,K2可精确计算细胞存活率。基于对“复杂”和“干净”样本的精确分析,K2可胜任在细胞处理的多个阶段(细胞收集 – 分离 – 冻存)对细胞状态进行评估。

Cellometer K2可用于分析多种细胞类型,包括:

Hepatocytes - Cellometer K2, cell viability counter Jurkat - Cellometer K2, cell viability counter

肝细胞

Jurkat

Splenocytes - Cellometer K2, cell viability counter PBMC - Cellometer K2, cell viability counter

脾细胞

PBMC

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双荧光染色法计数活/死有核细胞

绿色荧光活细胞图片

Green fluorescent live cell image - Cellometer K2, cell viability counter

红色荧光死细胞图片

Red fluorescent dead cell image - Cellometer K2, cell viability counter

为什么用双荧光染色法?

仅凭明场下的细胞形态有核和无核细胞难以被区分,而且台盼蓝染色也没有荧光染色对活死细胞的判断灵敏,所以我们强烈建议用双荧光染色法来精确分析原代细胞。K2细胞计数仪预设了多种用AO/PI双荧光染色法来分析原代细胞的应用。

AO/PI染色法

吖啶橙(AO)是一种核酸染料,可以渗透活细胞和死细胞,将所有有核细胞染色并发出绿色荧光。碘化丙啶(PI)只能渗透破损的细胞膜,将所有有核的死细胞染色并发出红色荧光。当细胞被AO和PI同时染色时,由于这两种染料间的荧光共振能量转移(FRET),所有活的有核细胞会发出绿色荧光,所有死的有核细胞会发出红色荧光。不含核的细胞或杂质不发荧光。

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细胞实验:细胞周期、凋亡和GFP

Cell Cycle

Cell Cycle - Cellometer K2, cell viability counter


Cellometer K2可以完成多种细胞实验,比如细胞周期、凋亡和GFP蛋白表达分析。K2的数据可以导出到De Novo FCS Express流式软件进行分析和展示。

用户可以用Nexcelom Bioscience的细胞周期试剂盒对细胞进行染色并分析SubG1, G0/G1, S和G2/M等期所占的比例。用户也可以用Nexcelom Bioscience的Annexin V-FITC/PI和Caspase 3/8试剂盒来分析凋亡细胞的比例。K2还可以分析表达GFP的细胞所占的比例。

K2 SubG1 G0/G1 S G2/M
AVE 1.0% 51.1% 13.6% 31.1%
STD 0.4% 1.6% 1.0% 1.1%

Apoptosis

Apoptosis Negative Control - Cellometer K2, cell viability counter

Untreated (Negative Control)

  Healthy Apoptotic Necrotic Debris
AVE 81.9% 8.1% 4.0% 6.0%
STD 1.6% 1.3% 0.4% 1.1%
CV 1.9% 16.1% 9.3% 18.3%


Apoptosis Positive Control - Cellometer K2, cell viability counter

Treated (Positive Control)

  Healthy Apoptotic Necrotic Debris
AVE 58.8% 24.7% 13.8% 2.7%
STD 1.9% 1.1% 1.2% 0.2%
CV 3.2% 4.3% 9.0% 9.2%

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排除红细胞、血小板或细胞碎片的干扰

AO和PI均是核酸染料。因为大部分成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核,所以只有活的和死的有核细胞才会被染色发出荧光。该方法不需裂解红细胞,能帮助用户节省时间和减少实验步骤。红细胞、血小板和细胞碎片都会在计数时被排除。

荧光染色法计数原代细胞的优势

右边的细胞图片显示了荧光染色法计数原代细胞的优势。明场图片显示了该样本中的有核细胞以及混杂的红细胞和血小板。不过在红色和绿色荧光通道中我们只能看到有核的活/死细胞。
Sample Measurement Total nucleated All RBC % RBC n

PBMC+RBC

Mean

1.26E+07

1.39E+07

1.23E+06

8.9%

10

 

CV

6.2%

8.8%

 

 

 

PBMC+1/2RBC

Mean

1.21E+07

1.27E+07

5.82E+05

4.6%

10

 

CV

4.8%

5.4%

 

 

 

PBMC+1/4RBC

Mean

1.22E+07

1.24E+07

2.27E+05

1.8%

10

 

CV

7.9%

7.3%

 

 

 

将不同数量的红细胞与新鲜的人PBMC混合。在明场通道中计数细胞总数(有核细胞 + 红细胞);在绿色荧光通道中计数有核细胞。不同浓度的红细胞(1.8%, 4.6%和8.9%)没有影响有核细胞的计数。

Fresh human PBMCs - Cellometer K2, cell viability counter

红细胞在明场图片中被标识出来(左图);荧光图片只显示发荧光的有核细胞,不显示红细胞(右图)。

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细胞图像可用于数据确认

没有完全相同的两个细胞

用户可通过K2的明场通道查看细胞的形态。

被圈定的细胞图片可用于确认图片的获取和分析是否正确。明场图片可用于普通细胞计数和台盼蓝存活率分析。

被圈定的荧光图片显示被计数的有核活/死细胞,可用于确认原代细胞的分析是否准确。

用户可确认:
  • 基于大小和形态判断细胞计数是否准确
  • 成团细胞计数是否精确
  • 红细胞、血小板、碎片是否被排除
Bright field counted cell image for Data Verification - Cellometer K2, cell viability counter Fluorescent counted cell image for Data Verification - Cellometer K2, cell viability counter

明场图片可用于确认粘连的细胞是否都被计数以及碎片是否被排除。在荧光图片中,被计数的活细胞用绿圈标出,被计数的死细胞用红圈标出。

  • 细胞图片可被保存和导出并用作文献发表和演示
  • 保存的图片可以用默认或自定义参数重新分析

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Cellometer分析原代肝细胞的方法

因为肝细胞的形态不均一、脆弱、易成团,用血球计数板人工计数肝细胞耗费精力且不准确。而且肝细胞的存活率下降很快,如果计数时间太长会导致结果的不准确和不一致。除此以外,肝细胞的质地很脆弱,不能承受鞘液的压力,所以也不适合用流式细胞仪分析。因此,Cellometer图像细胞仪是肝细胞分析的最佳仪器。

双荧光染色步骤

分析存活率时,将20 µl肝细胞样本和20 µl Cellometer AO/PI染料混合。吖啶橙(AO)与DNA结合发出绿色荧光,将肝细胞和碎片区分开。碘化丙啶(PI)只能渗透破损的细胞膜,和死细胞的DNA结合发出红色荧光。当细胞同时被AO和PI染色时,由于FRET (荧光共振能量转移)效应,死细胞中AO发出的绿色荧光被PI吸收,所以死的肝细胞发出红色荧光,活的肝细胞发出绿色荧光。这个染色过程简单、快速,结果准确。


Dual-fluorescence Staining Procedure - Cellometer K2, cell viability counter

明场图片(左)显示了原代肝细胞不均一的形态。双荧光图片(右)显示了被计数的活肝细胞(绿圈)和死肝细胞(红圈)。

Cellometer Analysis - Cellometer K2, cell viability counter

Cellomter分析

和染料混合后立即将20 µl染色的样本加入Cellometer细胞计数板并插入Cellometer K2计数仪,仪器会对板中的细胞自动拍照并计数。因为计数板是一次性的,所以不需清洗,也降低了交叉污染的风险。用户可用预设的原代肝细胞参数分析样本。

成团细胞和形状不规则细胞的分析

NCI-60 细胞系和成团的MCF-7细胞

NCI-60是美国国立卫生研究院(NIH)为药物筛选开发出的59株(原本60株)细胞系。

  • NCI-60系列中有57%的细胞系易成团,含有碎片,或形状和大小有较大差异
  • 所有59株NCI-60细胞系都在Cellometer细胞计数仪上验证过
美国国立癌症研究院(NCI)的所有40所癌症中心都在使用Cellometer细胞计数仪
Clumpy Cells - Cellometer K2, cell viability counter

成团细胞

MCF-7乳腺癌细胞系非常容易成团。Cellometer的模式识别软件可将细胞团中的细胞精确地分别计数(上图)。
Irregular-shaped Cells - Cellometer K2, cell viability counter

形状不规则细胞

用户可调节Cellometer软件的圆度设置来识别形状不规则的细胞,比如RD细胞和激活的T细胞。

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细胞大小分析和基于大小的细胞计数

Cell size histogram from Cellometer K2, cell viability counter

Cellometer K2细胞计数仪会基于细胞直径自动生成细胞大小直方图。

因为Cellometer可生成单个细胞大小的测量结果,所以可将多个样本叠加在一个直方图上,以便分析细胞直径随时间的变化。

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比人工计数快10倍

Hemacytometer under microscope using Cellometer K2, cell viability counter

使用血球计数板人工计数1 x 106个细胞需要花费大约5分钟的时间。同时计数活细胞和死细胞所需时间会在此基础上加倍。Cellometer Auto 2000可以在30秒内得到活细胞和死细胞的数目和浓度以及存活率百分比。

提高数据准确性和一致性

  • 省略清洗步骤
  • 减少判断错误
  • 排除红细胞的干扰
  • 避免记录和计算错误
  • 减少计数时间,提高工作效率

Cellomter准确性

Cellometer K2拥有优越的可重复性,荧光计数和分析结果的CV%都在10%以内。右边数据显示的是用PI染色后的Jurkat细胞的计数和存活率结果。

Sample N Value Average Live Cell Concentration % Viability CV of Concentration CV of Viability

Jurkat

24

3.61E+06

92.2%

8.9%

1.0%

Human PBMC

10

5.94E+06

96.0%

4.7%

0.5%

Mouse Splenocyte

10

1.86E+07

88.6%

5.6%

0.7%

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一次性计数板:无需清洗、无污染

Cellometer disposable images chambers for Cellometer K2, cell viability counter
Cellometer一次性细胞计数板由两个厚度一定的小室组成,利用标准的单通道移液器将20 µl细胞悬液注入小室内,再将细胞计数板插入到Cellometer计数仪后板内的细胞即可以直接被拍照显示。

一次性细胞计数板的优点:

  • 节省时间 – 无需清洗
  • 无交叉污染的风险
  • 降低了对用户的生物危害风险
  • 样品体积可控
  • 针对大细胞有更深更宽的计数板
  • 最为实惠的自动细胞计数仪耗材

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专业的在线和现场技术应用支持

经验丰富的Nexcelom技术支持专家可在北京时间上午9点至下午5点提供电话和在线支持,并可协助:
  • 创建新的细胞类型
  • 计数参数的优化
  • 故障排除
  • 培训新用户
  • Cellometer K2新仪器装机
K2 help
Cellometer K2软件界面右下角的帮助按钮可让用户直接访问:
  • 软件功能和说明书
  • 在线教程和培训视频
  • 提交技术支持申请

所有的Nexcelom应用科学家都100%专注于基于成像原理的细胞计数方法和实验应用。

Nexcelom应用科学家可以支持:

  • 现场演示
  • 培训
  • 故障排除
  • 技术研讨会

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